大鼠食管成纖維細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：人肝星形細(xì)胞,，LX-2細(xì)胞人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系,，5-8F細(xì)胞人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，95-D細(xì)胞人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞,，MHCC-97H細(xì)胞人宮頸癌細(xì)胞,，C33A細(xì)胞人宮頸癌細(xì)胞，CASKI細(xì)胞人宮頸癌細(xì)胞,，HELA-S3細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)ELISA試劑盒轉(zhuǎn)錄銜接因子3(TADA3)ELISA試劑盒轉(zhuǎn)錄銜接因子1(TADA1)ELISA試劑盒轉(zhuǎn)錄激活因子7(

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：腎臟組織

種屬來源：大鼠

細(xì)胞簡介：食管可分為頸段、胸段和腹段,。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端 ,， 胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi) ,，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連 ,，腹段很短與胃 相連。  哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層,、黏膜下層,、肌層和外膜 。其中 ,，粘膜層與黏膜下層中的結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成,。

培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：不規(guī)則 ，長梭形細(xì)胞

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ,，95%,；  CO2 ，  5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

大鼠食管成纖維細(xì)胞是一種貼壁生長細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則 ,，長梭形細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四,、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。

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