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詳細(xì)介紹
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介：人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分離自肝臟組織,；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官,，位于機(jī)體中的腹部位置,，在右側(cè)橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方,。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接,。通過(guò)控制激素調(diào)控的分泌和吸收，在保持,、調(diào)整和擴(kuò)大膽小管的結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用,，肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞在先天性和獲得性免疫應(yīng)答方面起著積極作用。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞約占肝細(xì)胞總數(shù)的5%,，其在肝內(nèi)膽道系統(tǒng)內(nèi)形成復(fù)雜的網(wǎng)狀管形結(jié)構(gòu),。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞具有復(fù)雜的生理代謝功能，參與肝臟的代謝,、排泌,、免疫等生理過(guò)程，在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起一定的作用,。研究表明,，常見(jiàn)的肝內(nèi)膽管病變例如原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等疾病,，都是以肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞為病變靶位,，進(jìn)而引起肝內(nèi)膽管上皮損傷。因此,，了解正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征和病變肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的病理特征對(duì)研究肝內(nèi)膽管病變的發(fā)病機(jī)制,、診斷和治療具有重要意義。
一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱(chēng) | 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1297 |
組織來(lái)源 | 肝臟組織 | 種屬來(lái)源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人肺微血管平滑肌 | 大鼠前脂肪細(xì)胞 |
TWIST蛋白抗體 | 磷化酪氨蛋白激BTK重組兔單克隆抗體 |
人大隱靜脈平滑肌細(xì)胞 | 磷化微管相關(guān)蛋白單克隆抗體 |
小鼠真皮成纖維細(xì)胞 | 乳腺腫瘤自身抗原LMO4重組兔單克隆抗體 |
大鼠真皮成纖維細(xì)胞 | 5-氨基乙酰丙合1重組兔單克隆抗體 |
人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 乙?；M蛋白H4(K16)重組兔單克隆抗體 |
小鼠軟骨細(xì)胞 | 補(bǔ)體C1qα鏈多肽重組兔單克隆抗體 |
大鼠軟骨細(xì)胞 | 磷化周期E1重組兔單克隆抗體 |
人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 脂質(zhì)運(yùn)載蛋白單克隆抗體 |
小鼠破骨細(xì)胞 | 微管蛋白重組兔單克隆抗體 |
大鼠破骨細(xì)胞 | 3-磷甘油醛脫氫（內(nèi)參）重組兔單克隆抗體 |
人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞白介4重組兔單克隆抗體 |
小鼠皮膚肥大細(xì)胞 | 整合相關(guān)蛋白CD47重組兔單克隆抗體 |
大鼠皮膚肥大細(xì)胞 | 硫氧還蛋白單克隆抗體 |
小鼠前脂肪細(xì)胞 | 殺菌肽/天蠶抗菌肽抗體 |
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
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