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大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

傳代比例：1:2

細(xì)胞簡介：大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞分離自小腸組織,；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通,，下端通過闌門與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi),，上連胃幽門,，下接盲腸，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分,。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因?yàn)槭澄锝?jīng)過小腸內(nèi)胰液,、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)械性消化后,，基本上完成了消化過程，同時(shí)營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜,、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成,。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞,，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺,，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切,；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞,、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞,。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短,，不形成紋狀緣,。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運(yùn)動(dòng)功能,，其中以吸收和分泌功能為主,。小腸腔面的環(huán)行皺襞從幽門附近開始出現(xiàn)，在十二指腸末段和空腸頭段極發(fā)達(dá),，向下逐漸減少和變矮,，至腸中段以下基本消失,。粘膜表面還有許多細(xì)小的腸絨毛，是由上皮和固有層向腸腔突起而成,，形狀不一,，以十二指腸和空腸頭段發(fā)達(dá)。絨毛于十二指腸呈葉狀,，于空腸呈指狀,，于回腸則細(xì)而短。環(huán)行皺襞和絨毛使小腸表面積擴(kuò)大20-30倍,，絨毛根部的上皮下隱至固有層形成管狀的小腸腺,，又稱腸隱窩，故小腸腺與絨毛的上皮是連續(xù)的,，小腸腺直接開口于腸腔,。
一、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長,，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。