大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：兔氣管平滑肌細(xì)胞小鼠呼吸道上皮細(xì)胞小鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞小鼠滑膜細(xì)胞小鼠肌腱干細(xì)胞小鼠肌源性干細(xì)胞小鼠脊髓成纖維細(xì)胞小鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞小鼠角膜成纖維細(xì)胞小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞小鼠角膜上皮細(xì)胞小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞

大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

傳代比例：1:2

細(xì)胞簡(jiǎn)介：大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞分離自小腸組織；小腸位于腹中,，上端接幽門(mén)與胃相通,，下端通過(guò)闌門(mén)與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場(chǎng)所。小腸盤(pán)曲于腹腔內(nèi),，上連胃幽門(mén),，下接盲腸，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分,。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因?yàn)槭澄锝?jīng)過(guò)小腸內(nèi)胰液,、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)械性消化后，基本上完成了消化過(guò)程,，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被小腸黏膜吸收了,。小腸管壁由黏膜、黏膜下層,、肌層和漿膜構(gòu)成,。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞，黏膜有許多絨毛,，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺，其開(kāi)口位于絨毛根部之間,。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切,；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞,、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞,。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似,，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短,，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化,、吸收和分泌及運(yùn)動(dòng)功能,，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細(xì)胞的收縮是負(fù)責(zé)腸蠕動(dòng)的動(dòng)力,，促使食物向下運(yùn)動(dòng),。腸黏膜上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機(jī)體面對(duì)病原微生物的第一道防線(xiàn),。因此，腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)等重要生理功能之外,，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生,、性質(zhì)和強(qiáng)度。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪(fǎng)直至問(wèn)題得到解決。
公司正在出售的產(chǎn)品：