大鼠胰腺星狀細胞的相關(guān)產(chǎn)品：人淋巴管內(nèi)皮細胞大鼠原代結(jié)腸成纖維細胞小鼠BMMs骨髓源性巨噬細胞兔頸靜脈內(nèi)皮細胞小鼠腦星形膠質(zhì)細胞小鼠胃粘膜上皮細胞大鼠卵巢表面上皮細胞兔卵巢內(nèi)膜細胞大鼠原代B淋巴細胞豬乳腺上皮細胞人宮頸癌細胞兔腎周細胞兔腹腔主動脈平滑肌細胞小鼠卵巢間質(zhì)細胞兔主動脈弓內(nèi)皮細胞

大鼠胰腺星狀細胞

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞簡介：大鼠胰腺星狀細胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道,。胰液中含有、胰dan白酶原,、脂肪酶等,。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成，胰島主要由4種細胞組成：α細胞、β細胞,、γ細胞及PP細胞,。α細胞分泌胰高血糖素，升高血糖,；β細胞分泌胰島素,，降低血糖；γ細胞分泌生長抑su,，以旁分泌的方式抑制α,、β細胞的分泌；PP細胞分泌胰多肽,，抑制胃腸運動,、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,，活化的胰腺星狀細胞(PSC)是胰腺纖維化的主要效應細胞,，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴,，并表達Desmin蛋白,，活化后的PSC則表達α-平滑肌肌動蛋白(alpha-SMA)。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,，并分別具有特異的標志物,。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的維生素A脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達Desmin,。激活狀態(tài)PSC陽性表達alpha-SMA,。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細胞培養(yǎng)6d,，胞漿中仍可見明顯的脂滴,，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失,。免疫細胞化學染色顯示,，細胞接種24h仍然表達Desmin，48h后Desmin基本不再表達,。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細胞開始表達alpha-SMA,，隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加，細胞表達alpha-SMA,，而不再表達Desmin,，說明細胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程,，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細胞激活,，傳代后細胞處于高度激活狀態(tài),。原代胰腺星狀細胞可作為慢性胰腺炎新藥的細胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時,，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細胞活化,，導致細胞形態(tài)、功能發(fā)生變化,，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積,。
一,、細胞基本屬性

原代細胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。