大鼠胰腺星狀細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠原代結(jié)腸成纖維細(xì)胞小鼠BMMs骨髓源性巨噬細(xì)胞兔頸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞大鼠卵巢表面上皮細(xì)胞兔卵巢內(nèi)膜細(xì)胞大鼠原代B淋巴細(xì)胞豬乳腺上皮細(xì)胞人宮頸癌細(xì)胞兔腎周細(xì)胞兔腹腔主動脈平滑肌細(xì)胞小鼠卵巢間質(zhì)細(xì)胞兔主動脈弓內(nèi)皮細(xì)胞

大鼠胰腺星狀細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞簡介：大鼠胰腺星狀細(xì)胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道,。胰液中含有、胰dan白酶原,、脂肪酶等,。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞,、β細(xì)胞,、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,，升高血糖,；β細(xì)胞分泌胰島素,，降低血糖；γ細(xì)胞分泌生長抑su,，以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽,，抑制胃腸運動,、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,，活化的胰腺星狀細(xì)胞(PSC)是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞,，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴,，并表達(dá)Desmin蛋白,，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白(alpha-SMA)。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,，并分別具有特異的標(biāo)志物,。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的維生素A脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達(dá)Desmin,。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA,。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d,，胞漿中仍可見明顯的脂滴,，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失,。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá),。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA,，隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA,，而不再表達(dá)Desmin,，說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程,，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活,，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型,，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時,，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化,，促使基質(zhì)增生,、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。