大鼠牙髓干細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：人B淋巴細(xì)胞人DC細(xì)胞人naive T cell細(xì)胞人NK細(xì)胞人T淋巴細(xì)胞人膀胱成纖維細(xì)胞人膀胱平滑肌細(xì)胞,，HBSMCGD細(xì)胞煙堿型受體α7(CHRNα7)ELISA試劑盒煙堿型受體α5(CHRNα5)ELISA試劑盒煙堿型受體α4(CHRNα4)ELISA試劑盒煙堿型受體α3(CHRNα3)ELISA試劑盒煙堿型受體α2(CHRNα2)ELISA試劑盒煙堿型受體

大鼠牙髓干細(xì)胞

培養(yǎng)基：原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%,；  CO2 ,，  5%

細(xì)胞簡介：干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞 ，它包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞 ,。  目前已經(jīng)成功分離培養(yǎng)包括來自骨髓,、肌肉、神經(jīng),、上皮等組織的成體干細(xì)胞 ,。牙髓干細(xì)胞是位于牙髓組織的一種成體干細(xì)胞。  2000年 ,，Gornhtos等首先成 功地分離培養(yǎng)出人牙髓干細(xì)胞 ,，為干細(xì)胞的研究開辟了一個(gè)新的領(lǐng)域。牙髓干細(xì) 胞具有同其他成體干細(xì)胞相似的生物學(xué)特性,具有較強(qiáng)的克隆形成能力 ,，可以分化 為牙髓組織中的終末功能細(xì)胞并具有一定的橫向分化能力,。  目前國內(nèi)外只有人牙 髓干細(xì)胞培養(yǎng)成功的報(bào)道,鼠牙髓干細(xì)胞的相關(guān)研究國內(nèi)外還未見報(bào)道 ，而鼠是實(shí) 驗(yàn)研究常用的模型,它具有取材容易,、與人同源性較高等優(yōu)點(diǎn),。
一、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長,，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。