人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠腸巨噬細(xì)胞小鼠腸黏膜上皮細(xì)胞小鼠腸平滑肌細(xì)胞小鼠腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠成骨細(xì)胞小鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PLGF 人胎盤生長(zhǎng)因子ELISA檢測(cè)試劑盒P-Selectin/CD62P 人P選擇ELISA檢測(cè)試劑盒RANTES/CCL5 人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子ELISA檢測(cè)試劑盒sCD30L 人可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體ELISA檢測(cè)試劑盒sCD40

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：肝臟組織

種屬來源：人

細(xì)胞簡(jiǎn)介：肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖 ,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,。肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是尿素合成 的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟對(duì)來自體內(nèi)和體外的許多非營(yíng)養(yǎng)性 物質(zhì)如各種藥物、毒物以及體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物,，具有生物轉(zhuǎn)化作用,。通過新陳代 謝將它們分解或以原形排出體外。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞是肝臟行使其功能的主要細(xì)胞, 執(zhí)行著許多重要的功能,如毒物的分解,、尿素的合成,、制造血漿中除幾種免疫球蛋 白之外的所有血漿蛋白質(zhì)等；也與肝臟的多種疾病如肝纖維化,、肝癌等的發(fā)生具 有密切關(guān)系,。

培養(yǎng)基：原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣，多角形細(xì)胞

傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣,，95%,；CO2 ，5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣,，多角形細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四,、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。

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