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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1412 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 骨髓 | 種屬來源 | 人 |
詳細(xì)介紹
人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
傳代比例：1:2
細(xì)胞簡介：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)分離自骨髓,；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用,，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等,；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的,、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞，可以向骨,、軟骨,、肌組織、皮膚,、脂肪,、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。在骨髓中,，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時(shí)間,、種植密度,、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響,。
一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1412 |
組織來源 | 骨髓 | 種屬來源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
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注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長,，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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