人甲狀腺成纖維細胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞小鼠角膜成纖維細胞大鼠角膜成纖維細胞人腦微血管內(nèi)皮細胞小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞大鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞人腦成纖維細胞小鼠牙乳頭細胞大鼠牙乳頭細胞

人甲狀腺成纖維細胞

一,、細胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：原代成纖維細胞培養(yǎng)體系

傳代特性：細胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣,，95%；CO2 ,，5%

細胞簡介：甲狀腺是脊椎動物非常重要的腺體,，  屬于內(nèi)分泌器官。在哺乳動物它位于頸部甲 狀軟骨下方,，氣管兩旁,。人類的甲狀腺形似蝴蝶。甲狀腺控制使用能量的速度,、 制造蛋白質(zhì),、調(diào)節(jié)身體對其他荷爾蒙的敏感性。

甲狀腺有兩層被膜：  氣管前筋膜包繞甲狀腺形成甲狀腺鞘,，稱為甲狀腺假被膜;甲 狀腺自身的外膜伸入腺實質(zhì)內(nèi),，  將腺體分為若干小葉，即纖維囊,，  又稱甲狀腺真 被膜,，  這是甲狀腺成纖維細胞的主要聚集場所。腺鞘與纖維囊之間的間隙內(nèi)有疏 松結(jié)締組織,，血管,，  神經(jīng)和甲狀旁腺等。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定,。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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