人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠真皮毛乳頭干細(xì)胞小鼠腦血管周細(xì)胞人肝成纖維細(xì)胞人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞兔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞小鼠小腸成纖維細(xì)胞小鼠主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞LH 兔子促黃體激ELISA檢測(cè)試劑盒PRL 兔子催乳ELISA檢測(cè)試劑盒LPO 豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物ELISA檢測(cè)試劑盒SOD 豚鼠超氧化物歧化ELISA檢測(cè)試劑盒PAP 豚鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物ELISA檢測(cè)試劑盒IL-12/P

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：淋巴管組織

種屬來源：人

細(xì)胞簡(jiǎn)介：人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞分離自淋巴管組織；淋巴管由毛細(xì)淋巴管匯合而成,。其形態(tài)結(jié) 構(gòu)與靜脈相似,，  但管徑較細(xì)，管壁較薄,，  瓣膜較多且發(fā)達(dá),，外形呈串珠狀。淋巴 管根據(jù)其位置分為淺,、深二種,。它們管位于皮下，  常與淺靜脈伴行,，收集皮膚和 皮下組織的淋巴,。深淋巴管與深部血管伴行，  收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴,。淺,、深淋 巴管之間有廣泛的交通支。淋巴管在向心行程中,，  通常經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)淋巴結(jié),， 從而把淋巴細(xì)胞帶入淋巴液。主要功能是濾過淋巴液,，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞,， 參與機(jī)體的免疫反應(yīng)。當(dāng)局部感染時(shí),，細(xì)菌,、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入， 引起局部淋巴結(jié)腫大,。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們,，  則病變可沿淋巴管的流 注方向擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。

培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞形態(tài)：鋪路石狀細(xì)胞,，  不規(guī)則細(xì)胞

傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣，95%,；CO2 ,，5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈鋪路石狀細(xì)胞,，  不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。

四,、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。

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