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詳細(xì)介紹
人陰道平滑肌細(xì)胞
培養(yǎng)基：含FBS,、EGF,、bFGF,、Insulin、Penicillin,、Streptomycin等
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡介：人陰道平滑肌細(xì)胞分離自陰道組織,；陰道位于膀胱、尿道和直腸之間,，是一個富有彈性的管狀器官,。它在人類生殖過程中具有多種生理功能，是連接子宮與外陰的通道,，是排出月經(jīng)血,、娩出嬰兒的必經(jīng)之路，也是一個重要的性交器官,。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層,，即黏膜層、肌層和外膜,。平滑肌,，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動脈和靜脈血管壁,、膀胱,、子宮、男性和女性生殖道,、消化道,、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜,。陰道平滑肌分離自陰道壁肌層組織,，平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細(xì)胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人陰道平滑肌細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1395 |
組織來源 | 陰道組織 | 種屬來源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔子宮平滑肌細(xì)胞 | 大鼠棕色前脂肪細(xì)胞 |
核呼吸因子-1重組兔單克隆抗體 | 血紅蛋白α1/α-Globin抗體 |
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注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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