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詳細(xì)介紹
人前脂肪細(xì)胞
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin
傳代特性：可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡介：人前脂肪細(xì)胞分離自脂肪組織,；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉,；貯存的脂肪,，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用,。它們影響胰島素敏感性,、血壓水平、內(nèi)皮功能,、纖溶活動及炎癥反應(yīng),，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng),。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細(xì)胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細(xì)胞,；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細(xì)胞。前脂肪細(xì)胞呈梭形,，有分裂和增殖的能力,；成熟的脂肪細(xì)胞呈圓形,，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力,。由于前脂肪細(xì)胞是一類具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化前體細(xì)胞，與肥胖有著非常密切的關(guān)系,。前脂肪細(xì)胞是一種類成纖維細(xì)胞,，在演變的過程中不斷吸收脂質(zhì)，終成為成熟的脂肪細(xì)胞,。前脂肪細(xì)胞對外界機(jī)械損傷的抵抗力較強(qiáng),，可望成為軟組織缺損的有益填充物。
一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人前脂肪細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1402 |
組織來源 | 脂肪組織 | 種屬來源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 | ASTE1蛋白抗體 |
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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