人牙周膜干細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠瘢痕成纖維細(xì)胞小鼠卵巢內(nèi)膜細(xì)胞兔纖維環(huán)細(xì)胞小鼠紋狀體神經(jīng)元細(xì)胞人附睪成纖維細(xì)胞大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞豬垂體細(xì)胞兔毛囊角質(zhì)細(xì)胞人直腸上皮細(xì)胞兔脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人牙周膜干細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：人牙周膜干細(xì)胞分離自牙周膜組織；  牙周膜(牙周韌帶,、牙周間隙)是由致密結(jié)締組 織所構(gòu)成,。多數(shù)纖維排列成束，  纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi),，另一端則埋于牙槽窩  骨壁里,，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi)；牙周膜內(nèi)有神經(jīng),、血管,、淋巴和上皮細(xì)胞等。   成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，  由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì) 胞分化而來(lái),。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells ，  MSCs)來(lái)源于胚胎時(shí)期  的中胚層組織,，  具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能,，具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)  胞,、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力,，運(yùn)用 MSCs來(lái)修復(fù)軟骨  損傷具有很好的應(yīng)用前景，目前已能夠從骨髓,、脂肪、滑膜,、骨骼,、肌肉等組織  以及羊水、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。牙周膜干細(xì)胞參與了牙周  組織的病變、修復(fù)及再生過(guò)程?，F(xiàn)在,，利用牙周膜干細(xì)胞建立體外模型，已經(jīng)成  為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
公司正在出售的產(chǎn)品：