人視網膜色素上皮細胞公司正在出售的產品：小鼠淋巴細胞白血病L12(種屬鑒定)貓腎細胞CRFK（種屬鑒定）豬肺泡巨噬細胞3D4/21（種屬鑒定）非洲綠猴腎細胞VEROC08(E6)（種屬鑒定）小鼠胰腺癌細胞LTPA（種屬鑒定）人骨肉瘤細胞143B(STR鑒定正確)人食管癌細胞ECA9(STR鑒定正確)生長調節(jié)致癌基因γ/黑瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒生長調節(jié)致癌基因β

一,、細胞基本屬性

 

組織來源：眼組織

種屬來源：人

細胞簡介：視網膜色素上皮位于脈絡膜和光感受器細胞外節(jié)之間,，是視網膜下腔和脈絡膜血 管之間的離子、水,、營養(yǎng)物質和代謝終產物轉運通道,。視網膜色素上皮參與視黃 循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性,，并分泌多種 生長因子,，  幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。

培養(yǎng)基：原代上皮細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁培養(yǎng)

細胞形態(tài)：上皮樣,，不規(guī)則細胞

傳代特性：細胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣,，95%；CO2 ,，5%

二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

人視網膜色素上皮細胞是一種貼壁培養(yǎng)細胞,，細胞形態(tài)呈上皮樣,，不規(guī)則細胞，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經1000rpm,，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通,；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。

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