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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1928 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 正常外周血組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
詳細(xì)介紹
小鼠B淋巴細(xì)胞
培養(yǎng)基：原代B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系
傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞簡介：B淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞存在于胎肝的造血細(xì)胞島中,，此后B淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生和分化場所逐漸被骨髓所代替,。成熟的B細(xì)胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi),。B細(xì)胞在抗原刺激下可分化為漿細(xì)胞,，漿細(xì)胞可合成和分泌抗體（免疫球蛋白），主要執(zhí)行機(jī)體的體液免疫,。
B細(xì)胞在骨髓內(nèi)分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標(biāo)志的表達(dá),。B細(xì)胞在發(fā)育分化過程中，同樣也經(jīng)歷選擇作用,，以除去非功能性基因重排B細(xì)胞和自身反應(yīng)性B細(xì)胞,，形成周圍成熟的B細(xì)胞庫。B細(xì)胞表面有多種膜表面分子,，識別抗原,、與免疫細(xì)胞和免疫分子相互作用，也是分離和鑒別B細(xì)胞的重要依據(jù),。B細(xì)胞表面分子主要有白細(xì)胞分化抗原,、MHC以及多種膜表面受體。
一,、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 小鼠B淋巴細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1928 |
組織來源 | 正常外周血組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 懸浮 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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NUGC-4細(xì)胞 | 6號染色體開放閱讀框195抗體 |
OAW28(alsobeknownas41M)細(xì)胞 | 6號染色體開放閱讀框81抗體 |
OVISE細(xì)胞 | 紫外切除修復(fù)蛋白RAD23A抗體 |
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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