小鼠背根神經(jīng)節(jié)細胞的相關(guān)產(chǎn)品：人食管平滑肌細胞人少突膠質(zhì)細胞人黑色瘤細胞兔鞏膜上皮細胞小鼠肺巨噬細胞兔腎上腺皮質(zhì)細胞兔牙髓干細胞兔心臟微血管內(nèi)皮細胞人扁桃體成纖維細胞兔心肌成纖維細胞人臍血DC細胞人子宮瘤細胞人小腸粘膜上皮細胞兔II型肺泡上皮細胞兔頸動脈成纖維細胞

小鼠背根神經(jīng)節(jié)細胞

一,、細胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：MSCM基礎(chǔ)培養(yǎng)基：，F(xiàn)BS,，Penicillin,，Streptomycin等

包被條件：-

傳代特性：不建議傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細胞簡介：小鼠背根神經(jīng)節(jié)細胞分離自脊髓組織；背根神經(jīng)節(jié)（DRG）是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的感覺神經(jīng)元,；背根神經(jīng)節(jié)分散存在于PNS,，定位于和脊髓緊密相連的脊神經(jīng)根上，DRG起源于神經(jīng)嵴,，由多潛能前體細胞遷移分化形成,。每個神經(jīng)節(jié)主要由感覺神經(jīng)元和神經(jīng)纖維構(gòu)成。神經(jīng)元周圍有衛(wèi)星細胞,，軸突由雪旺細胞包繞形成髓鞘,。DRG是外周和中樞纖維聯(lián)系的一個重要中繼站，在神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要作用,。DRG神經(jīng)元直接參與一些遺傳性和獲得性神經(jīng)的病理生理,。DRGs的體外培養(yǎng)模型已廣泛用于軸突的導(dǎo)向及再生、突觸發(fā)育和可塑性,、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成,，神經(jīng)營養(yǎng)因子作用及受體分布、神經(jīng)細胞衰老機制,、基因治療,、組織工程等神經(jīng)科學的研究，成為遺傳性,、獲得性神經(jīng)的一個新的研究途徑,。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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