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詳細介紹
小鼠破骨細胞
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
傳代特性：屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
傳代比例：1:2
細胞簡介：小鼠破骨細胞分離自骨組織和骨髓；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞,，位于骨組織表面的淺凹處,。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng),，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡,，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化,。因此多數(shù)學(xué)者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結(jié)構(gòu)、功能探討骨吸收,，形成相互平衡的機制,。但破骨細胞是一種終末分化細胞，屬于不增殖細胞群,，不能增殖和傳代,，只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短。
一,、細胞基本屬性
細胞名稱 | 小鼠破骨細胞 | 商品貨號 | A01X1900 |
組織來源 | 骨髓 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細胞形態(tài) | 多核巨細胞 |
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定,。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人角膜上皮細胞 | A-204人橫紋肌肉瘤細胞專用培養(yǎng)基 |
重組兔脂肪合成單克隆抗體 | APC標記的LARP7蛋白抗體 |
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293T人胚腎細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的胎盤和前列腺相關(guān)蛋白DLG5抗體 |
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5-8F人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌系細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白1抗體 |
769-P人腎腺癌細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的19號染色體開放閱讀框77抗體 |
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786-O[786-0]人腎透明腺癌細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的S100鈣結(jié)合蛋白ζ抗體 |
95-D人高轉(zhuǎn)移肺癌 細胞專用培養(yǎng)基 | 小鼠破骨細胞APC標記的骨形態(tài)發(fā)生蛋白7抗體 |
95-D人高轉(zhuǎn)移肺癌 細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的磷化微管相關(guān)蛋白抗體 |
A172人膠質(zhì)母瘤細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的微管相關(guān)絲氨/蘇氨激4抗體 |
A375+EGFP人惡性黑色瘤+EGFP細胞專用培養(yǎng)基 | APC標記的HIG1區(qū)域家族成員2A抗體 |
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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