小鼠睪丸支持細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：兔角膜基質(zhì)細(xì)胞人結(jié)腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞人腎小管上皮細(xì)胞人腎小球系膜細(xì)胞人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞人腎足細(xì)胞人輸尿管上皮細(xì)胞人輸尿管平滑肌細(xì)胞人膀胱上皮細(xì)胞人膀胱平滑肌細(xì)胞人膀胱成纖維細(xì)胞人前列腺上皮細(xì)胞人前列腺成纖維細(xì)胞人頜下腺囊腫細(xì)胞人腎成纖維細(xì)胞

小鼠睪丸支持細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

傳代比例：1:2

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠睪丸支持細(xì)胞分離自睪丸,；睪丸支持細(xì)胞又稱Sertoli細(xì)胞,，在體內(nèi)呈不規(guī)則的高錐體形，細(xì)胞基部附著在基膜上,，頂部伸至曲精小管腔面,。它是生精細(xì)胞的支架，為其提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),，能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白,，為其提供高濃度的雄激素環(huán)境等，還具有構(gòu)成血-睪屏障,，形成睪丸內(nèi)微環(huán)境,，調(diào)節(jié)精子發(fā)生等功能。睪丸支持細(xì)胞是睪丸的主要組成細(xì)胞,，能分泌多種生長(zhǎng)因子和免疫抑制因子,，不僅可為精子提供營(yíng)養(yǎng)支持和免疫保護(hù)，也能對(duì)其他細(xì)胞,，如胰島和神經(jīng)細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)支持,，而且當(dāng)其與胰島或神經(jīng)細(xì)胞共移植時(shí)，也能夠?yàn)檫@些細(xì)胞提供免疫保護(hù),，提高植活率,。因此，睪丸支持細(xì)胞在細(xì)胞移植中具有廣泛的應(yīng)用前景,。制備高活率的Sertoli不僅對(duì)Sertoli的基礎(chǔ)研究有重要價(jià)值,，而且在精子發(fā)生等領(lǐng)域有重要意義。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。