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人輸尿管上皮細(xì)胞

培養(yǎng)基：原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣,，95%；CO2 ,，5%

細(xì)胞簡介：輸尿管上接腎盂,，下連膀胱，是一對細(xì)長的管道,，  呈扁圓柱狀,，管徑平均為0.5-  0.7厘米。成人輸尿管全長25-35厘米,，  位于腹膜后,，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下 降進(jìn)入骨盆。輸尿管管壁為三層組織所構(gòu)成,。外系筋膜組織,，包圍著整個腎盂  和輸尿管，  其中有豐富的血管和神經(jīng)纖維,；中間為三層肌肉,，  其內(nèi)外層為縱行肌  ，中層為環(huán)形??；里為粘膜層，與腎盂及膀胱粘膜是連貫的,。粘膜下層有豐富  的網(wǎng)狀淋巴管,，  是腎臟向下、膀胱向上感染的途徑之一,。  輸尿管的生理功能是將  尿液從腎盂排入膀胱,。尿液在輸尿管內(nèi)的運送不是被動的過程 ,而是通過輸尿管蠕 動方式主動地進(jìn)行。輸尿管有較厚的平滑肌層．可作節(jié)律性的蠕動,，使尿液不斷  地流入膀胱,。因此對輸尿管平滑肌運動的研究，是尿動力學(xué)的重要研究方向,。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。