小鼠肝星狀細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠胃黏膜上皮細(xì)胞人肝實質(zhì)細(xì)胞人肝星狀細(xì)胞人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞人肝Kuffer細(xì)胞人直腸成纖維細(xì)胞人肝成纖維細(xì)胞人直腸上皮細(xì)胞人直腸平滑肌細(xì)胞人膽囊微血管內(nèi)皮細(xì)胞人膽囊成纖維細(xì)胞人膽囊平滑肌細(xì)胞人膽囊動脈內(nèi)皮細(xì)胞人食管癌相關(guān)成纖維細(xì)胞人食管纖維瘤細(xì)胞

小鼠肝星狀細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：小鼠肝星形細(xì)胞分離自肝臟組織,；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官,，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接,。肝星形細(xì)胞(HSC)又名肝貯脂細(xì)胞、維生素A貯存細(xì)胞,、竇周細(xì)胞,、Ito細(xì)胞等，是肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源,。HSC在激活后可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,，各種可導(dǎo)致肝纖維化的因素均將HSC作為終靶細(xì)胞,。正常情況下，HSC處于靜止?fàn)顟B(tài),，當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)或受到機(jī)械刺激等損傷時,，HSC的表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚停せ畹腍SC可通過增生和分泌細(xì)胞外基質(zhì)參與肝纖維化的形成及肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建,，此過程也是肝纖維化的中心環(huán)節(jié),。肝星形細(xì)胞分布于肝臟的Disse間隙內(nèi)，是合成,、分泌細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源,，在肝纖維化的發(fā)生中處于重要地位。肝星形細(xì)胞是肝臟的間充質(zhì)細(xì)胞,，約占肝臟細(xì)胞總數(shù)的8%-13%,。作為肝臟合成細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞群，肝星形細(xì)胞不僅能分泌蛋白多糖,、糖蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,，合成一定量的膠原酶以維持正常的基底膜結(jié)構(gòu)，還能通過其突起的收縮參與肝竇的微循環(huán)調(diào)節(jié),。此外,，肝星形細(xì)胞能通過合成肝細(xì)胞生長因子、胰島素樣生長因子,、表皮生長因子等促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和肝再生,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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