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詳細介紹
小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
傳代比例：1:2
細胞簡介：小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞,、血小板和各種白細胞,。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細菌,、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓。出生時,，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大，脂肪細胞增多,，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的,、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞,，可以向骨、軟骨,、肌組織,、皮膚,、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,，因此可以作為組織工程中的種子細胞,。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%-0.1%,，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中,，受貼壁時間,、種植密度、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響,。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞 | 商品貨號 | A01X1909 |
組織來源 | 骨髓 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定,。
實驗步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
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注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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