小鼠滑膜成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞大鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞大鼠腹膜間皮細(xì)胞大鼠腸巨噬細(xì)胞大鼠內(nèi)括約肌平滑肌細(xì)胞大鼠腸道干細(xì)胞細(xì)胞大鼠腸粘膜上皮細(xì)胞小鼠腹腔巨噬細(xì)胞大鼠腎小管上皮細(xì)胞大鼠腎小球系膜細(xì)胞大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞大鼠腎足細(xì)胞大鼠輸尿管上皮細(xì)胞大鼠膀胱間質(zhì)細(xì)胞大鼠膀胱上皮細(xì)胞

小鼠滑膜成纖維細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：MCM基礎(chǔ)培養(yǎng)基：，F(xiàn)BS,，Penicillin,，Streptomycin等

包被條件：-

傳代特性：可傳3-5代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠滑膜細(xì)胞分離自滑膜組織；滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層,，淡紅色,，平滑閃光，薄而柔潤，由疏松結(jié)締組織組成,。關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu),，除關(guān)節(jié)軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關(guān)節(jié)腔的肌腱,、韌帶等均全部為滑膜所包裹,。滑膜分泌滑液,，在關(guān)節(jié)活動(dòng)中起重要作用,；正常滑膜分為兩層,，即薄的細(xì)胞層(內(nèi)腔層)和血管層(內(nèi)膜下層),，是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜，貼附于非關(guān)節(jié)面部分,，覆蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上,，不在軟骨面上，此部分稱為邊緣區(qū)或“裸區(qū)",?；こ史奂t色，光滑發(fā)亮,、濕而潤滑,，有時(shí)可見絨毛，內(nèi)含膠原性纖維,。 滑膜細(xì)胞有A,、B兩型。巨噬細(xì)胞樣A型細(xì)胞表面有絲狀偽足+漿膜內(nèi)陷,、囊泡,、線粒體、溶酶體,、胞漿纖維和高爾基體,，具有吞噬功能；B型細(xì)胞缺少此種特征,，但含有高濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),，具有合成包括酶在內(nèi)的蛋白質(zhì)。其功能是分泌透明質(zhì)酸,，內(nèi)膜下層含有泡沫組織,，有脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞和巨大細(xì)胞,，與滑膜平行的有彈性纖維,，能防止滑膜的皺襞形成?；ぜ?xì)胞主要功能：（1）滑膜細(xì)胞產(chǎn)生潤滑液成分,，并且與關(guān)節(jié)腔的吸收和血液/潤滑液交換有關(guān)。（2）滑膜細(xì)胞增生,，表現(xiàn)為不依賴于支持物生長,，并且分泌大量的效應(yīng)分子來促進(jìn)炎癥和關(guān)節(jié)損壞。（3）是自身自分泌和旁分泌網(wǎng)絡(luò)中效應(yīng)因子的一部分,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長,，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
公司正在出售的產(chǎn)品：