小鼠結腸粘膜上皮細胞公司正在出售的產品：人乳腺癌細胞；BC－027小鼠雜交瘤細胞,；13D8人乳腺癌細胞,；BC－028小鼠雜交瘤細胞；4E-BP1小鼠雜交瘤細胞,；ABL2小鼠雜交瘤細胞,；Akt2小鼠雜交瘤細胞；Akt3內酰胺β2(LACTβ2)ELISA試劑盒內酰胺β(LACTβ)ELISA試劑盒內收蛋白3(ADD3)ELISA試劑盒內收蛋白2(ADD2)ELISA試劑盒內收蛋白1(ADD1)ELI

一,、細胞基本屬性

 

組織來源：正常結腸組織

種屬來源：小鼠

細胞簡介：結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸,、橫結腸,、降結腸和乙狀結腸4部，大部分固定于腹后壁,，結腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：粘膜（上皮層，固有層,，粘膜肌層）,，粘膜下層，肌層,，外膜,。結腸黏膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下導致結腸癌，是常見的惡性腫瘤之一,。因此,，體外培養(yǎng)結腸黏膜上皮細胞為研究進一步結腸癌等疾病提供了前提和基礎。

培養(yǎng)基：原代上皮細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：鋪路石狀,，不規(guī)則細胞

傳代特性：根據細胞特性,。

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

小鼠結腸粘膜上皮細胞是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈鋪路石狀，不規(guī)則細胞,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通；由于運輸的原因,，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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