小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：豹貓肺成纖維樣細(xì)胞,；LCL4猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞,；ELS1大鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞,；RS1大鼠腎細(xì)胞；RK1大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞,；RM1社鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞,；CWBRS1大鼠肺成纖維樣細(xì)胞；RL1接觸蛋白關(guān)聯(lián)蛋白1(CNTNAP1)ELISA試劑盒接觸蛋白6(CNTN6)ELISA試劑盒接觸蛋白5(CNTN5)ELISA試劑盒接觸蛋白4(CNTN4)ELISA試劑

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來(lái)源：膀胱組織

種屬來(lái)源：小鼠

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞分離自膀胱組織,；膀胱是主要由平滑肌細(xì)胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲(chǔ)存和排出尿液,。膀胱平滑肌細(xì)胞表型的調(diào)控和可誘導(dǎo)一氧化氮合酶的表達(dá)與多種病理狀況有關(guān),，包括膀胱功能障礙。研究表明,，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細(xì)胞的增殖,，膀胱平滑肌細(xì)胞的分化依賴于膀胱上皮細(xì)胞釋放的因子。膀胱平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的分泌表型可通過(guò)細(xì)胞所經(jīng)歷的機(jī)械變形頻率而改變,。平滑肌是許多疾病中的共同路徑,，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過(guò)程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進(jìn)展的重要一步,。膀胱壁由三層組織組成,，由內(nèi)向外為粘膜層，肌層和外膜,。逼尿肌為膀胱壁層肌肉的總稱,，由平滑肌構(gòu)成。分為三層,，內(nèi),、外層為縱行肌，中層為環(huán)形肌,。環(huán)狀肌厚,，堅(jiān)強(qiáng)有力,。逼尿肌收縮,，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出,。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口,，防止尿液自膀胱漏出,。膀胱平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)：大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞不僅為組織工程膀胱,、尿道提供種植細(xì)胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎(chǔ)與前提,。

培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被,。

四,、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決,。

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