小鼠腦血管周細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人卵巢上皮細(xì)胞兔骨骼肌細(xì)胞兔骨骼肌成纖維細(xì)胞兔纖維環(huán)細(xì)胞兔髓核細(xì)胞兔破骨細(xì)胞兔皮膚成纖維細(xì)胞兔角質(zhì)形成細(xì)胞兔表皮干細(xì)胞兔前脂肪細(xì)胞兔脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞兔真皮毛乳頭細(xì)胞兔外根鞘細(xì)胞兔肌腱干細(xì)胞兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

小鼠腦血管周細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：原代周細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：腦血管周細(xì)胞分布于腦組織的微血管系統(tǒng)中,，調(diào)節(jié)血管形成、穩(wěn)定和功能的關(guān)鍵因素,。周細(xì)胞典型的特征是有一個(gè)突出的核,，核周圍胞漿較少，有許多平行于微血管長(zhǎng)軸的突起,，這些突起逐漸變細(xì)并包繞微血管腔,，起到對(duì)管腔的支持作用。同時(shí),，一個(gè)周細(xì)胞可以通過伸展的突起與微循環(huán)中的多個(gè)毛細(xì)血管接觸,。此外，周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞間的相互作用在血管新生中具有極為重要的作用,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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