化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1972 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 眼組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
詳細(xì)介紹
小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
培養(yǎng)基：ECM基礎(chǔ)培養(yǎng)基：,，F(xiàn)BS，Penicillin,，Streptomycin等,；
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
傳代特性：不建議傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡介：小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分離自眼組織,；視網(wǎng)膜色素上皮為一層矮六角棱柱狀細(xì)胞，高8～10μm,，寬12～18μm,。細(xì)胞頂部伸出許多長5～7μm的突起。在胚胎發(fā)生時(shí),，上皮基部和脈絡(luò)膜緊密連接,，但頂部與視細(xì)胞連接不緊，故易在此發(fā)生視網(wǎng)膜剝離,。電鏡觀察,，細(xì)胞之間有緊密連接、中間連接和縫隙連接,，基底部有胞膜內(nèi)褶和線粒體,，故推測色素上皮有運(yùn)輸離子和屏障作用。胞核圓形,，位于細(xì)胞基部,。頂部胞質(zhì)含許多橢圓或圓形的黑色素顆粒和含板層碎片的殘余體?；鎯?nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá),，分布于色素顆粒和殘余體之間。有高爾基復(fù)合體,、溶酶體,、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴。這些結(jié)構(gòu)反映了色素上皮的多種功能：①色素顆粒由粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生,，經(jīng)高爾基復(fù)合體轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)頂部。已知兩棲類和魚類受強(qiáng)光照射時(shí),，色素顆粒移入突起中,；處于黑暗時(shí)，色素顆粒又回到胞質(zhì)中,，這說明色素上皮有吸收光和保護(hù)視細(xì)胞免受強(qiáng)光刺激的作用,；②脂滴有集聚和貯存維生素A的作用，通過滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的酯化與轉(zhuǎn)運(yùn),，參與視細(xì)胞合成視紫紅質(zhì),；③能吞噬脫落的視桿細(xì)胞外節(jié)膜盤，藉溶酶體酶水解消化,，形成殘余體,；④分泌蛋白多糖,，粘合和維持視桿、視錐與色素上皮的相互位置關(guān)系,，從而保證視紫紅質(zhì)的更新和營養(yǎng)物質(zhì)的傳遞,。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1972 |
組織來源 | 眼組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
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注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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