小鼠輸尿管上皮細胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠尿道上皮細胞K7M2WT(K7M2-WT)-LUC小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光標(biāo)記LLC小鼠肺癌細胞LLC+LUC小鼠肺癌細胞熒光標(biāo)記L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠淋巴瘤細胞L929小鼠成纖維細胞L Wnt-3A小鼠皮下結(jié)締組織細胞MA-891小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞MB49小鼠膀胱癌細胞MB49+LUC小鼠膀胱癌細胞熒光標(biāo)記MC38小鼠結(jié)腸癌細

小鼠輸尿管上皮細胞

一,、細胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細胞簡介：小鼠輸尿管上皮細胞分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂,，下連膀胱,，是一對細長的管道，呈扁圓柱狀,，位于腹膜后,，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進入骨盆,。輸尿管有三個狹窄部：一個在腎盂與輸尿管移行處(輸尿管起始處),；一個在越過小骨盆入口處；后一個在進入膀胱壁的內(nèi)部,。這些狹窄是結(jié)石及壞死組織容易停留的部位,。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu)，即瓦耳代爾鞘,，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管,。臨床上將輸尿管分為上、中,、下三段,，也可稱為腹段、盆段,、膀胱段,。其中，腹段自腎盂輸尿管交界處,，到跨越髂動脈處,；盆段，自髂動脈到膀胱壁,；膀胱段,，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜、輸尿管開口,。輸尿管管壁分為4層,，黏膜層,、固有層、肌層,、外膜,。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細胞,；固有層由細密的結(jié)締組織構(gòu)成,，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維,；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成,；外膜為疏松結(jié)締組織，營養(yǎng)血管由外膜進入輸尿管,。其中,，輸尿管上皮細胞主要分布于黏膜層。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定,。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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