小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠雜交瘤細胞,；GLP人肺細胞；BEAS-2B/CYP2A13小鼠雜交瘤細胞,；GST小鼠雜交瘤細胞,；GSK3alpha小鼠雜交瘤細胞,；HER-2小鼠雜交瘤細胞；GSTP1小鼠雜交瘤細胞,；hPin1酰胺(GLS)ELISA試劑盒酰胺合成(GS)ELISA試劑盒酰胺果糖-6-磷轉(zhuǎn)氨2(GFPT2)ELISA試劑盒谷氨脫羧樣蛋白1(GADL1)ELISA試劑盒谷氨

一,、細胞基本屬性

 

組織來源：視網(wǎng)膜組織

種屬來源：小鼠

細胞簡介：小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜,。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離,。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞,、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用,。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐,、視桿細胞層、外界膜,、外顆粒層,、外叢狀層、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層,、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層,、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細胞層,，專司感光,，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上,，而視錐細胞則在中心凹處多,。第二層叫雙節(jié)細胞，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系,，負責(zé)聯(lián)絡(luò)作用,。第三層叫節(jié)細胞層,，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū),，其分辨能力,。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞貼壁后呈單層排列,，部分細胞聚集成團,，細胞呈圓形或橢圓形,，核圓且相對透明,，有些細胞膜上伸出短而小的突起,；該細胞為高度分化細胞,，在體外屬于不增殖群,。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞是青光眼病理性損害的主要細胞,，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的死亡可導(dǎo)致視功能不可逆損傷，研究視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損害的細胞學(xué)和分子生物學(xué)機制有利于青光眼發(fā)病機制的研究,。

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：神經(jīng)元細胞樣

傳代特性：屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

傳代比例：1:2

二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈神經(jīng)元細胞樣,，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。

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