小鼠心肌細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠血管外膜成纖維細(xì)胞DV-90細(xì)胞EB1細(xì)胞EB2細(xì)胞EBC-1細(xì)胞ECC10細(xì)胞ECC12細(xì)胞EC-GI-10細(xì)胞EFM-19細(xì)胞EoL-1細(xì)胞EOMA細(xì)胞EpH41424細(xì)胞EVSA-T細(xì)胞G-402細(xì)胞F4N(MEL)細(xì)胞

小鼠心肌細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞簡介：小鼠心肌細(xì)胞分離自心臟組織,；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官,，主要功能是為血液流動提供壓力，把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構(gòu)成,，左心房,、左心室、右心房,、右心室四個腔組成,。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通,，心房與心室之間有瓣膜(房室瓣),，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流,。心臟的作用是推動血液流動,，向器官、組織提供充足的血流量,，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無機鹽,、尿素和尿酸等),，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心肌細(xì)胞呈菱形,、多邊形等不規(guī)則形狀,；細(xì)胞培養(yǎng)2h后開始貼壁，呈梭形,；到12h左右,，細(xì)胞開始伸出偽足，呈菱形,、多角形,；細(xì)胞分離培養(yǎng)48h以后，大部分伸出偽足,、呈巴掌狀,，部分心肌細(xì)胞會出現(xiàn)搏動；心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,，在體外不增殖,。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動,，且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡便,、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點,。利用培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在探索非血液動力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié),，研究心肌細(xì)胞的生物力學(xué),、凋亡、受體下調(diào),、缺血預(yù)處理,、信號通路、對作用于心臟的新藥進行篩選并對其安全性進行評價以及從培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中提取有價值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景,，對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進行細(xì)胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。