小鼠纖維環(huán)細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,；NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,；NCI-H1299人乳腺癌細(xì)胞；HCC1937人膠質(zhì)瘤細(xì)胞；GOS-3人胰腺癌細(xì)胞系,；SW1990小鼠皮膚黑色瘤細(xì)胞,；B16-F人肝癌細(xì)胞；Hep3B2.1-7封閉蛋白12(CLDN12)ELISA試劑盒封閉蛋白11(CLDN11)ELISA試劑盒封閉蛋白10(CLDN10)ELISA試劑盒封閉蛋白1(CLD

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：椎間盤組織

種屬來源：小鼠

細(xì)胞簡介：纖維環(huán),，位于椎間盤的周緣部，由纖維軟骨組成,，纖維環(huán)的纖維在椎體間斜行,，在橫切面上排列成同心環(huán)狀，相鄰環(huán)的纖維具有相反的斜度,，而相互交叉,。纖維環(huán)細(xì)胞位于膠原纖維束之前，合成和分泌纖維環(huán)細(xì)胞外基質(zhì),，維持正常的纖維環(huán)結(jié)構(gòu)和功能,。

培養(yǎng)基：原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：多角形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

小鼠纖維環(huán)細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈多角形細(xì)胞,，不規(guī)則細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。

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