小鼠嗅鞘細胞的相關產(chǎn)品：小鼠冠狀動脈平滑肌細胞HLC-1細胞HLE細胞HMC-1-8細胞HMCB細胞H-Meso-1細胞HMV-II細胞HO-1-N-1細胞HOP-92細胞HPAF-II細胞HROBMC01細胞HROBML03細胞Hs294T細胞HT細胞Hs688(A)T細胞

小鼠嗅鞘細胞

一、細胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

傳代比例：1:2

細胞簡介：小鼠嗅鞘細胞分離自嗅球組織,；嗅鞘細胞(OECs)是在功能上介于施旺細胞和少突膠質細胞之間的一種特殊的膠質細胞，具有神經(jīng)營養(yǎng),、抑制膠質增生,、瘢痕形成、成鞘作用等,；為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強的遷移的特性,，使其成為促進中樞神經(jīng)再生的理想候選細胞之一。嗅鞘細胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細胞之一,，其特點為終身具有神經(jīng)再生功能,，還能夠釋放多種神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)粘附分子,。被認為是髓鞘化能力的膠質細胞,，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細胞與膠質細胞,、雪旺細胞在表現(xiàn)型上有共同點,，它們都能促進軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),，也存在于外周神經(jīng)中,。嗅鞘細胞被認為是一種可塑性很高的細胞，它可表現(xiàn)出多種細胞形態(tài)和細胞表面標志,，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中,，嗅鞘細胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR,、GFAP、和O4可標記大部分在體嗅鞘細胞,，然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽性嗅鞘細胞仍然可以在P75NTR陽性細胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細胞層,，還有一定比率的嗅鞘細胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的神經(jīng)元，壽命為4-12周,，隨著新細胞的生長,，又建立了新的神經(jīng)支配關系。嗅鞘細胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上,，沿嗅神經(jīng)的全長,，從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定,。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。

五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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