一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(紅色熒光)公司*的商品：生長分化因子3抗體三肉豆蔻甘油酯 7-Methoxycoumarin-3-carboxylic Acid
磷化糖原合酶激酶3β抗體三葉甙,；三葉苷（標(biāo)準(zhǔn)品） Pyranin
G蛋白偶聯(lián)受體1抗體桑白皮（標(biāo)準(zhǔn)品） Sulfonfluorescein
G蛋白β1抗體/鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白β亞1桑根L N-Succinimidyl 7-Hyd

產(chǎn)品屬于：

商品介紹：

試劑盒組分：

TdT酶—————————40μl

熒光標(biāo)記液——————960μl

TdT酶稀釋液(選用)———00μl

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時,，會激活一些DNA內(nèi)切酶,，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測,，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder,。基因組DNA斷裂時,，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl

Transferase,TdT)的催化下加上紅色熒光探針Cy3(Cyanine 3)標(biāo)記的dUTP,，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理,。

TUNEL法特異性檢測細(xì)胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂,，但不會檢測出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開,，另一方面也不會把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞,。

極少數(shù)細(xì)胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測,。在個別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性,。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時檢測多個凋亡指標(biāo),。
培養(yǎng)操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布,；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）,；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出,，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測,。

胃泌素(Gastrin)elisa試劑盒英文名稱：Gastrin ELISA Kit載脂蛋白D抗體包裝5g

胃泌素(GAS)elisa試劑盒英文名稱：GAS ELISA Kit酸敏感離子通道1抗體包裝1g

胃動素(MTL)elisa試劑盒英文名稱：MTL ELISA Kit雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（C端）包裝100ml

胃動素(MOT)elisa試劑盒英文名稱：MOT ELISA Kit髓系,、淋巴、混合系白血病易位基因10抗體包裝25ml

胃蛋白酶(PG)elisa試劑盒英文名稱：PG ELISA Kit腺苷酸環(huán)化酶1抗體包裝100g

胃蛋白酶(Pepsin)elisa試劑盒英文名稱：Pepsin ELISA Kit腺瘤樣息肉抗體包裝25g

1(VK1)elisa試劑盒英文名稱：VK1 ELISA Kit溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶抗體包裝500g

E(VE)elisa試劑盒英文名稱：VE ELISA Kit錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝1g

3(VD3)elisa試劑盒英文名稱：VD3 ELISA Kit磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體包裝5g

2(VD2)elisa試劑盒英文名稱：VD2 ELISA Kit?；摎涿负荛L鏈抗體包裝25g

D(VD)elisa試劑盒英文名稱：VD ELISA Kit信號轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接結(jié)合蛋白抗體包裝5g

C(VC)elisa試劑盒英文名稱：VC ELISA Kit錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族3抗體包裝1g

6(VB6)elisa試劑盒英文名稱：VB6 ELISA Kit有絲分裂激酶B抗體包裝5g

B12(VB12)elisa試劑盒英文名稱：VB12 ELISA Kit磷酸化Ack1抗體包裝1g

A(VA)elisa試劑盒英文名稱：VA ELISA Kit磷酸化Ack1抗體包裝5g

固酮類還原酶家族7成員A2抗體白介素6(IL6)AZD-5438 是有效的 CDK1/2/9 抑制劑，IC50 值分別為 16 nM/6 nM/20 nM,；對GSK3β,，CDK5，CDK6的抑制作用較弱,。&n
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(紅色熒光)重組水蛭素

其他 重組螞蟥素

英文名稱： Hirudin recombinant

產(chǎn)品規(guī)格： BR,，95%

包　　裝： 20毫克

CAS號：8001-27-2

級別：BR

純度：≥95%

比活性：≥10000 ATU/mg

性狀：凍干粉

用途：生化研究。

保存：-20℃

實驗報告：

一,、分離與培養(yǎng)：

1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將1mm3左右大小,；

2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；

二、免疫熒光鑒定：

1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；

4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；

5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；

6,、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。