小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Lu-134-A(LU-134-A-H)細(xì)胞Lu-134-B細(xì)胞Lu-139細(xì)胞Lu-140細(xì)胞Lu-143細(xì)胞Lu-24細(xì)胞LU65細(xì)胞LU65A細(xì)胞LU65B細(xì)胞LU65C細(xì)胞LU99細(xì)胞LU99A細(xì)胞MDX細(xì)胞LU99C細(xì)胞

小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道,。胰液中含有、胰dan白酶原,、脂肪酶等,。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞,、β細(xì)胞,、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,，升高血糖,；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖,；γ細(xì)胞分泌生長抑su素,，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌,；PP細(xì)胞分泌胰多肽,，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮,。成體胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞作為胰腺前體細(xì)胞,，已證實(shí)具多向分化潛能，在合適的外源性刺激下可分化成胰島樣細(xì)胞,，胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的胰島樣細(xì)胞免疫原性如何,，轉(zhuǎn)分化的胰島樣細(xì)胞在治療糖尿病時(shí)是否發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，對(duì)干細(xì)胞臨床治療糖尿病具有重要意義,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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