小鼠牙周膜干細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞KP4-3細(xì)胞KS-1細(xì)胞KU-19-19細(xì)胞KURAMOCHI細(xì)胞KYSE-270細(xì)胞KYSE-520細(xì)胞KYSE-70細(xì)胞LCells細(xì)胞L1210細(xì)胞L5178-R細(xì)胞LC-1/sq細(xì)胞LC-1/sq-SF細(xì)胞LS123細(xì)胞LC-2/ad細(xì)胞

小鼠牙周膜干細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

傳代特性：可傳5代左右

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞簡介：小鼠牙周膜干細(xì)胞分離自牙齒組織,；牙周組織是由牙周膜,、牙槽骨和牙齦三部分組成，它的主要功能是支持,、固定和營養(yǎng)牙齒,。牙周膜它是一種致密的纖維組織，一端埋入牙骨質(zhì),，一端連接牙槽骨,，實(shí)際上是牙齒通過牙周膜被懸吊在牙槽窩中,，使牙齒能牢固地固定在頜骨的牙槽窩內(nèi),，具有一定的彈性，有利于緩沖牙齒承受的咀嚼力,。牙髓的神經(jīng),、血管通過根尖孔與牙槽骨和牙周膜的血管、神經(jīng)相連接,。營養(yǎng)物質(zhì)通過血液供給牙髓,，營養(yǎng)牙齒，所以牙齒和牙周組織關(guān)系密切,。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,，MSCs）來源于胚胎時期的中胚層組織，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能,，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力,，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓、脂肪,、滑膜,、骨骼,、肌肉等組織以及羊水、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。目前，牙周支持組織重建主要依賴機(jī)械,、藥物或引導(dǎo)組織再生技術(shù),，隨著分子生物學(xué)、組織工程學(xué)和干細(xì)胞技術(shù)的飛速發(fā)展,，牙周組織再生工程技術(shù)成為牙周病治療研究的熱點(diǎn),，牙周膜干細(xì)胞(Periodontal ligament stem cell，PDLSC）是牙周組織再生工程的關(guān)鍵種子細(xì)胞之一,。因此,，關(guān)于牙周膜干細(xì)胞的研究逐漸成為熱點(diǎn)。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。