小鼠牙周膜干細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞KP4-3細(xì)胞KS-1細(xì)胞KU-19-19細(xì)胞KURAMOCHI細(xì)胞KYSE-270細(xì)胞KYSE-520細(xì)胞KYSE-70細(xì)胞LCells細(xì)胞L1210細(xì)胞L5178-R細(xì)胞LC-1/sq細(xì)胞LC-1/sq-SF細(xì)胞LS123細(xì)胞LC-2/ad細(xì)胞

小鼠牙周膜干細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

傳代特性：可傳5代左右

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠牙周膜干細(xì)胞分離自牙齒組織；牙周組織是由牙周膜,、牙槽骨和牙齦三部分組成,，它的主要功能是支持、固定和營(yíng)養(yǎng)牙齒,。牙周膜它是一種致密的纖維組織,，一端埋入牙骨質(zhì)，一端連接牙槽骨,，實(shí)際上是牙齒通過牙周膜被懸吊在牙槽窩中,，使牙齒能牢固地固定在頜骨的牙槽窩內(nèi)，具有一定的彈性,，有利于緩沖牙齒承受的咀嚼力,。牙髓的神經(jīng)、血管通過根尖孔與牙槽骨和牙周膜的血管,、神經(jīng)相連接,。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過血液供給牙髓，營(yíng)養(yǎng)牙齒,，所以牙齒和牙周組織關(guān)系密切,。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織,，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能,，具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力,，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景，目前已能夠從骨髓,、脂肪,、滑膜、骨骼,、肌肉等組織以及羊水,、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。目前,，牙周支持組織重建主要依賴機(jī)械、藥物或引導(dǎo)組織再生技術(shù),，隨著分子生物學(xué),、組織工程學(xué)和干細(xì)胞技術(shù)的飛速發(fā)展,，牙周組織再生工程技術(shù)成為牙周病治療研究的熱點(diǎn)，牙周膜干細(xì)胞(Periodontal ligament stem cell,，PDLSC）是牙周組織再生工程的關(guān)鍵種子細(xì)胞之一,。因此，關(guān)于牙周膜干細(xì)胞的研究逐漸成為熱點(diǎn),。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。