小鼠牙齦上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞KALS-1細(xì)胞Kasumi-3細(xì)胞KE-39細(xì)胞Kelly細(xì)胞KHM-1B細(xì)胞KLM-1細(xì)胞KM12細(xì)胞KMM-1細(xì)胞KMS-11細(xì)胞KMS-21BM細(xì)胞KMS-26細(xì)胞KMS-27細(xì)胞KP4-1細(xì)胞KMS-28PE細(xì)胞

小鼠牙齦上皮細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：小鼠牙齦上皮細(xì)胞分離自牙齦組織,；牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織，呈粉紅色,、有光澤,、質(zhì)堅韌。牙齦邊緣稱為齦緣,，正常呈月芽形,。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突,。也叫齒齦,，通稱牙床；是指包住齒頸的黏膜組織,，粉紅色,，內(nèi)有很多血管和神經(jīng),。牙齦上皮長期被認(rèn)為是抵御口腔中持續(xù)存在的細(xì)菌的被動免疫屏障，隨著對牙周致病菌的不斷認(rèn)識,，發(fā)現(xiàn)牙齦上皮不僅僅是抵御微生物的物理屏障,，上皮細(xì)胞還可以分泌抗菌多肽，參與先天性免疫,。牙齦上皮作為牙周組織的第一道屏障,，在抵御牙周炎細(xì)菌入侵的過程中發(fā)揮了重要作用，建立正常牙齦上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,，將為各種牙齦上皮相關(guān)的研究提供穩(wěn)定的實(shí)驗?zāi)Ｐ汀?/span>
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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