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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1776 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 主動脈組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
詳細(xì)介紹
小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞簡介：小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自主動脈組織,；主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運(yùn)行路徑為：升主動脈起于左心室,，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動脈弓,，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈,；在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈,，以上為胸主動脈，至第4腰椎體下緣分為左,、右髂總動脈,；髂總動脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動脈。主動脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動脈內(nèi)面的單層細(xì)胞,，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài),，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生。因此,，主動脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具,。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成,。它形成血管的內(nèi)壁,，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng),，由心臟直至小的微血管,。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1776 |
組織來源 | 主動脈組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。
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注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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