小鼠支氣管上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人臍靜脈平滑肌細(xì)胞NCIADRRES細(xì)胞NCI-H1048細(xì)胞NCI-H1092細(xì)胞NCI-H1155細(xì)胞NCI-H1341細(xì)胞NCI-H1373細(xì)胞NCI-H1417[H1417]細(xì)胞NCI-H1435細(xì)胞NCI-H1568細(xì)胞NCI-H1573細(xì)胞NCI-H1581細(xì)胞NCI-H1618細(xì)胞NCI-H1819[H1819]細(xì)胞NCI-H1648細(xì)胞

小鼠支氣管上皮細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：小鼠支氣管上皮細(xì)胞分離自支氣管組織,；支氣管(Bronchi)，是指由氣管分出的各級分枝,，由氣管分出的一級支氣管,，即左、右主支氣管,。左主支氣管與右主支氣管相比較,，前者較細(xì)長，走向傾斜,；后者較粗短,，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管,。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架,，而支氣管不是,。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體,、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞,，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子,，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng),。支氣管上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病,、肺癌,、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性,，因此,，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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