詳細介紹
組織來源:肺
種屬來源:兔
細胞簡介:肺微血管周細胞分布于肺組織的微血管系統(tǒng)中,調節(jié)血管形成,、穩(wěn)定和功能的關鍵因素,。周細胞典型的特征是有一個突出的核,核周圍胞漿較少,,有許多平行于微血管長軸的突起,,這些突起逐漸變細并包繞微血管腔,起到對管腔的支持作用,。同時,,一個周細胞可以通過伸展的突起與微循環(huán)中的多個毛細血管接觸。此外,,周細胞和內皮細胞間的相互作用在血管新生中具有極為重要的作用,。
培養(yǎng)基:原代周細胞培養(yǎng)體系
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):長梭形細胞,不規(guī)則細胞
傳代特性:根據細胞特性
消化液:0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
一,、細胞基本屬性
產品名稱 | 產品規(guī)格 | 商品貨號 |
兔肺微血管周細胞 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | A01X2017 |
二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
三,、使用方法
兔肺微血管周細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈長梭形細胞,,不規(guī)則細胞,,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代,;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,,放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次,;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,,待細胞回縮變圓后,,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)待細胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察,;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,,1000rpm,,離心5min,保留沉淀,;
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,,重懸沉淀,,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,;
3)經1000rpm,,離心5min,丟棄上清,,用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,,接種于新的培養(yǎng)瓶內;
4)待細胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察,;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,,避免細胞因沒貼好影響實驗,;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%),,依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
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四,、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,,請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,消化時間不宜過長,,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),,便于和技術部溝通,;由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。