人胃黏膜上皮細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠腎腺癌細(xì)胞 RAG（種屬鑒定）小鼠腎癌細(xì)胞帶熒光Renca+LUC（種屬鑒定）云南宣威肺腺癌細(xì)胞系綠色熒光標(biāo)記XWLC-05+GFP人卵巢癌耐藥株SKOV3/DDP(STR鑒定正確)人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫細(xì)胞U251MG/TMZ (STR鑒定正確)小鼠胸腺淋巴瘤細(xì)胞EL-4-B51（種屬鑒定）人肝細(xì)胞HL-7702[L-02](STR鑒定正確)凝血血栓調(diào)節(jié)蛋白

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來(lái)源：胃組織

種屬來(lái)源：人

細(xì)胞簡(jiǎn)介：人胃黏膜上皮細(xì)胞分離自胃黏膜組織；胃黏膜柔軟,，活體呈橘紅色,。胃空虛時(shí)形成許多皺襞，充盈時(shí)變平坦,。幽門處的黏膜形成環(huán)形皺襞,，突向腔內(nèi)稱幽門瓣,。胃黏膜可分為三層,，即上皮層(單層柱狀上皮),、固有層(由結(jié)締組織構(gòu)成、含有大量的胃腺)和黏膜肌層(為薄層平滑肌,、排列成內(nèi)環(huán)外縱),。胃黏膜上皮細(xì)胞源自胃黏膜的上皮層，細(xì)胞為單層柱狀上皮,，排列整齊,，能分泌黏液覆蓋于胃黏膜的表面，防止胃酸和胃蛋白對(duì)胃黏膜的損害,。體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細(xì)胞為研究細(xì)胞功能及致病因子,、藥物、激素對(duì)細(xì)胞的損傷,、保護(hù)和功能調(diào)控提供了簡(jiǎn)單而*的模型

培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人胃黏膜上皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被,。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決,。

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