兔肺動脈外膜成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞C-33A人宮頸癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基C3H/10T1/2 Clone8小鼠胚胎成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基C6大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基Caco-2人結(jié)腸腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基caki-1人腎透明癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞專用培養(yǎng)基CAKI-2人腎透明癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基CAL-27人舌鱗癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基Calu-1人肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基Calu-3人肺腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基cal

兔肺動脈外膜成纖維細(xì)胞

培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：肺動脈是由內(nèi)膜,、中層彈力層和外膜構(gòu)成，三層緊密貼合在一起,。其中,，外膜是專門的支持組織，外膜成纖維是外膜的主要成分,，在血管炎癥反應(yīng),、血管重塑等方面發(fā)揮重要作用。
一,、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進行細(xì)胞鑒定,。

實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。