人心肌細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠外周血白細(xì)胞小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞小鼠外周血來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞小鼠外周血中性粒細(xì)胞小鼠微血管周細(xì)胞小鼠胃黏膜上皮細(xì)胞小鼠胃平滑肌細(xì)胞小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞小鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞小鼠小腸平滑肌細(xì)胞

人心肌細(xì)胞

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：人心肌細(xì)胞分離自心臟組織,；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官,，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分,。心臟由心肌構(gòu)成,，左心房、左心室,、右心房,、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開,，故互不相通,，心房與心室之間有瓣膜(房室瓣)，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,，而不能倒流,。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官,、組織提供充足的血流量,，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳,、無(wú)機(jī)鹽,、尿素和尿酸等)，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能,。心肌細(xì)胞呈菱形,、多邊形等不規(guī)則形狀；細(xì)胞培養(yǎng)2h后開始貼壁,，呈梭形,；到12h左右,，細(xì)胞開始伸出偽足，呈菱形,、多角形,；細(xì)胞分離培養(yǎng)48h以后，大部分伸出偽足,、呈巴掌狀,，部分心肌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)搏動(dòng)；心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,，在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點(diǎn),，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動(dòng),，且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡(jiǎn)便、定量,、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點(diǎn),。利用培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在探索非血液動(dòng)力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié)，研究心肌細(xì)胞的生物力學(xué),、凋亡,、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理,、信號(hào)通路,、對(duì)作用于心臟的新藥進(jìn)行篩選并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)以及從培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中提取有價(jià)值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，對(duì)于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。
一、細(xì)胞基本屬性

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫)，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。