兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：雜交瘤細(xì)胞株,；4A-1G7雜交瘤細(xì)胞株,；F112雜交瘤細(xì)胞株；2E9S.suis-AK雜交瘤細(xì)胞株,；12B2E1人胚腎細(xì)胞,；293T人胚腎細(xì)胞；HEK293-MAN1A1&A2-DKO雜交瘤細(xì)胞株,；6C9G4Kaptin蛋白(KPTN)ELISA試劑盒Juxtanodin蛋白(JN)ELISA試劑盒Janus激3(JAK3)ELISA試劑盒Janus激2(JA

一,、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：骨髓

種屬來源：兔

細(xì)胞簡介：兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓,。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞,，可以向骨,、軟骨、肌組織,、皮膚,、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%,，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件：要求較高，在培養(yǎng)過程中,，受貼壁時(shí)間,、種植密度、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基：pH值等條件的影響,。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

傳代比例：1:2

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時(shí)間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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