操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無(wú)細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:增強(qiáng)型CCK-8試劑盒
英文名稱:Enhanced Cell Counting Kit-8
產(chǎn)品規(guī)格:100次|500次|2500次|10000次
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速,、高靈敏度檢測(cè)的試劑盒,比普通的CCK-8試劑盒具有更好的檢測(cè)靈敏度和更寬的線性范圍,。
WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物,,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan(參考圖1),。細(xì)胞增殖越多越快,,則顏色越深,;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺,。對(duì)于同樣的細(xì)胞,,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。 |
WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品,,和MTT或其它MTT類(lèi)似產(chǎn)品如XTT,、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先,,MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,,需要有特定的溶解液來(lái)溶解;而WST-8和XTT,、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,,WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解,。再次,WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定,,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定,。另外,WST-8和MTT,、XTT等相比線性范圍更寬,,靈敏度更高。
WST-8和WST-1相比,,檢測(cè)靈敏度更高,,更易溶解,并且更加穩(wěn)定,。
本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè),,也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè),或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè),。
本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的增強(qiáng)型CCK-8溶液,,無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作,。無(wú)須使用同位素,所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成,。不必洗滌細(xì)胞,,不必收集細(xì)胞,也不必采用額外的步驟去溶解formazan,??梢杂糜诖笈繕悠返臋z測(cè),。酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。
WST-8對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性,。加入增強(qiáng)型CCK-8溶液顯色后,,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板,使檢測(cè)時(shí)間更加靈活,,便于找到最佳測(cè)定時(shí)間,。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療,。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,,否則會(huì)影響使用效果。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果,。
5、最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6,、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存,。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,,從而影響檢測(cè)結(jié)果,。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光,。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞,。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)elisa試劑盒英文名稱:CIC ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體包裝500g
血小板因子4(PF-4/CXCL4)elisa試劑盒英文名稱:PF-4/CXCL4 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體包裝1g
血小板因子3(PF-3)elisa試劑盒英文名稱:PF-3 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體包裝1g
血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)elisa試劑盒英文名稱:PDGFsR-α ELISA Kit氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶6G抗體包裝5g
血小板衍生生長(zhǎng)因子CC(PDGF-CC)elisa試劑盒英文名稱:PDGF-CC ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體包裝5ml
血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)elisa試劑盒英文名稱:PDGF-BB ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體包裝100mg
血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)elisa試劑盒英文名稱:PDGF-AB ELISA Kit型肝炎病核結(jié)合蛋白-1抗體包裝1g
血小板衍生生長(zhǎng)因子AA(PDGF-AA)elisa試劑盒英文名稱:PDGF-AA ELISA Kit芳香基硫酸酯酶K抗體包裝100MG
血小板生長(zhǎng)因子(PDGF)elisa試劑盒英文名稱:PDGF ELISA Kit神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體包裝50MG
血小板生成素(TPO)elisa試劑盒英文名稱:TPO ELISA Kit錨定蛋白G抗體包裝25g
血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)elisa試劑盒英文名稱:GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體包裝5g
血小板活化因子(PAF)elisa試劑盒英文名稱:PAF ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型抗體包裝1g
血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)elisa試劑盒英文名稱:TSP-1 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體 (N端抗體)包裝250mg
血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)elisa試劑盒英文名稱:FDP ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體包裝5g
血纖蛋白原γ鏈(FGG)elisa試劑盒英文名稱:FGG ELISA Kit內(nèi)收蛋白抗體包裝250mg
磷酸化芳香N-乙?;D(zhuǎn)移酶抗體白介素2(IL2)XL413 hydrochloride 是一種有效的,,選擇性的,ATP 競(jìng)爭(zhēng)性的 Cdc7 抑制劑,,IC50 值為 3.4 nM,,同時(shí)對(duì) CK2 和 PIM1
增強(qiáng)型CCK-8試劑盒紫杉醇
其他 漿果赤霉素III
英文名稱: Paclitaxel
其他英文名稱: 7,11-Methano-5H-cyclodeca[3,4]benz[1,2-b]oxete benzenepropanoic acid deriv;Taxal,;Taxol A
產(chǎn)品規(guī)格: 分析標(biāo)準(zhǔn)品,,99%
包 裝: 10毫克/20毫克/100毫克/500毫克
CAS號(hào):33069-62-4
C47H51NO14=853.92
級(jí)別:分析標(biāo)準(zhǔn)品
含量:≥99.0%
熔點(diǎn):213~216℃
性狀:結(jié)晶粉末。
用途:生化研究,。
保存:RT,,避光