兔滑膜成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人皮膚肥大細(xì)胞人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人胰腺癌細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人前庭鞘膜瘤細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人膽囊上皮細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基湖羊瘤胃上皮細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人副神經(jīng)節(jié)瘤細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人睪丸支持細(xì)胞永生化 細(xì)胞專用培養(yǎng)基人頸靜脈球瘤細(xì)胞

兔滑膜成纖維細(xì)胞

一,、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞簡介：滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層，淡紅色,，平滑閃光,，薄而柔潤，由疏松結(jié)締組織組成,。關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu),，除關(guān)節(jié)軟骨,、半月軟骨板以外,即便是通過關(guān)節(jié)腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹,。

            滑膜分泌滑液,，在關(guān)節(jié)活動中起重要作用。正?；し譃閮蓪?，即薄的細(xì)胞層(內(nèi)腔層)和血管層(內(nèi)膜下層)，是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜,，貼附于非關(guān)節(jié)面部分,，覆蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上，不在軟骨面上,，此部分稱為邊緣區(qū)或“裸區(qū)",。滑膜呈粉紅色,，光滑發(fā)亮,、濕而潤滑，有時可見絨毛,，內(nèi)含膠原性纖維,。

            滑膜細(xì)胞有A、B兩型,。巨噬細(xì)胞樣A型細(xì)胞，表面有絲狀偽足,、漿膜內(nèi)陷,、囊泡、線粒體,、溶酶體,、胞漿纖維和高爾基體，具有吞噬功能,；B型成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS) ,，有高濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)，是介導(dǎo) RA 關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定,。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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