人主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞人宮頸癌細(xì)胞人膀胱癌細(xì)胞人骨肉瘤細(xì)胞急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞豬扁桃體上皮細(xì)胞（永生化）豬（萊蕪）腹部脂肪干細(xì)胞（永生化）抗類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒抗染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白4(CHD4)抗體ELISA試劑盒抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)ELISA試劑盒抗醛縮(ALD)自身抗體ELISA試劑盒抗鞘磷脂抗

一、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：主動脈組織

種屬來源：人

細(xì)胞簡介：主動脈瓣施半月瓣,，位于左心室和主動脈之間,，抑制射入主動脈的血液回流入左心室。

主動脈瓣鈣化可引起主動脈瓣狹窄關(guān)閉不全等,，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變,，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明,，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一,。

培養(yǎng)基：原代間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：長梭形、不規(guī)則細(xì)胞

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

二,、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈長梭形、不規(guī)則細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被,，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通,；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。

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