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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×106 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1223 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 人的正常主動(dòng)脈組織 | 種屬來(lái)源 | 人 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 1×106 |
商品貨號(hào) | A01X1223 |
細(xì)胞詳述
主動(dòng)脈瓣施半月瓣,，位于左心室和主動(dòng)脈之間，抑制射入主動(dòng)脈的血液回流入左心室,。
主動(dòng)脈瓣鈣化可引起主動(dòng)脈瓣狹窄關(guān)閉不全等,，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明,，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動(dòng)脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一,。
該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。
注意事項(xiàng)： 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代,，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,，不能用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
細(xì)胞特性
1） 組織來(lái)源于人的正常主動(dòng)脈組織,。
2） 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽(yáng)性,。
3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4） 不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。
5） 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形,、不規(guī)則細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通,；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔晶狀體上皮細(xì)胞 | L Wnt-3A小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
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HEPA1-6小鼠肝癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體 |
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HEPA1-6+LUC小鼠肝癌熒光標(biāo)記細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體 |
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HL-1小鼠心肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的補(bǔ)體C4 γ 鏈蛋白抗體 |
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HT-22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的鈣磷蛋白1抗體 |
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L929小鼠成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的乙型肝炎病毒X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體 |
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