一,、細胞基本屬性

組織來源：正常腎組織

種屬來源：兔

細胞簡介：腎是脊椎動物的一種器官，屬于泌尿系統(tǒng)的一部分,，負責(zé)過濾血液中的雜質(zhì),、維持體液和電解質(zhì)的平衡，后產(chǎn)生尿液經(jīng)尿道排出體外,；同時也具備內(nèi)分泌的功能以調(diào)節(jié)血壓,。

周細胞是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮,。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量,。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接,，包括多種整合素,、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合,。

培養(yǎng)基：原代周細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：長梭形,，不規(guī)則細胞

傳代特性：根據(jù)細胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

兔腎周細胞是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈長梭形，不規(guī)則細胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

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