人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞HCC2218細(xì)胞HCC-2279細(xì)胞HCC2935細(xì)胞HCC38細(xì)胞HCC4006細(xì)胞HCC44細(xì)胞HCC-78細(xì)胞HCC-95細(xì)胞HCT116AKT1/2(-/-)細(xì)胞HEL9217細(xì)胞HeLa細(xì)胞HEPG2/221細(xì)胞Hs294T細(xì)胞Hs362T細(xì)胞

人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞詳述

神經(jīng)鞘膜瘤是常見的的周圍神經(jīng)鞘形成的腫瘤,，為良性腫瘤。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因,。

注意事項：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代,，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞,。

細(xì)胞特性

1） 細(xì)胞來源于手術(shù)切除的腫瘤組織,。

2）細(xì)胞鑒定：S100免疫熒光染色為陽性。

2） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。

4） 不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌,。

5）細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng),。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實驗步驟：

一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。

六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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