雞胚成纖維細胞永生化的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠心肌細胞bEnd.3小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株Beta-TC-6小鼠胰島瘤胰島Beta細胞BV2小鼠小膠質(zhì)細胞C17.2小鼠神經(jīng)干細胞C2C12小鼠成肌細胞C3H/10T1/2 Clone8 小鼠胚胎成纖維細胞CT26小鼠結(jié)腸癌細胞CT26+LUC小鼠結(jié)腸癌細胞熒光標記CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細胞E0771小鼠髓樣乳腺癌細胞E14小鼠胚胎干細胞EL-4小鼠淋巴瘤細

一,、細胞基本屬性

細胞詳述

近年來,，有關(guān)干細胞的研究是生物技術(shù)領(lǐng)域的熱點之一。胚胎成纖維細胞具有相對容易獲得,，增殖能力強等特點,，因此胚胎成纖維細胞常作為哺乳動物干細胞培養(yǎng)的飼養(yǎng)層細胞，主要分泌謀學(xué)細胞因子,，如成纖維細胞生長因子,，白血病抑制因子等，以促進干細胞增殖及抑制分化,。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因,。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,，不能用來培養(yǎng)細胞,。

細胞特性

1) 細胞來源于實驗動物正常胚胎組織。

2) 細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%,。

4) 不含有 HIV-1、 HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式：長梭狀細胞,，貼壁培養(yǎng),。
實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。

二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦。

三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。

八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。

九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，yi酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

原代細胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定,。

公司正在出售的產(chǎn)品：