一,、細胞基本屬性

組織來源：乳腺組織

種屬來源：兔

細胞簡介：兔乳腺上皮細胞分離自乳腺組織,；乳腺是復管泡狀皮膚腺，主要由腺上皮細胞組成,，并具有特殊的泌乳功能,。在妊娠期，導管末梢發(fā)育成腺泡,；近年來的許多研究都表明乳腺癌,、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細胞(MEC)有密切聯(lián)系，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關鍵步驟,。乳腺是乳房的腺體組織,，乳腺由導管和腺泡組成，腺泡是分泌乳汁的重要部分,。乳腺的正常發(fā)育是由體內激素和局部合成的生長因子共同調控,，其中乳腺表達的生長因子對乳腺上皮細胞的增殖、分化,、凋亡產(chǎn)生極大的影響,。乳腺上皮細胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織，為貼壁生長型細胞,，呈多角形,、圓形以及短梭形；乳腺上皮細胞主要功能即生乳功能,。

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2，5%

傳代比例：1:2

二,、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三,、使用方法

兔乳腺上皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四,、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通,；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。

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